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發(fā)布時間：2021-10-25 07:07
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你對制備色譜陌生嗎？還不進(jìn)來看看它的特點
很多初接觸色譜領(lǐng)域的朋友對制備色譜這個名詞比較陌生。其實，在化學(xué)化工醫(yī)學(xué)等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是較為典型的制備色譜，換句話說，將分析色譜的進(jìn)樣量增大，同時得出大量的所需物質(zhì)（餾分）的過程就可以稱為制備色譜。分析色譜的目的，是分析出混合物中一個（或者幾個）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。而制備色譜系統(tǒng)則是利用制備色譜的思想能得到純化物質(zhì)的多個分析測試設(shè)備聯(lián)用的總稱。 分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們在分析色譜上取得了良好的分離效果時，可以將其放大，應(yīng)用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調(diào)整上樣量，流速，梯度：
1.上樣量的調(diào)整： 他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān)：
具體關(guān)系時；制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；
2.流速的調(diào)整：
制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；
3.梯度的調(diào)整：
制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速；
液相色譜操作要求
1、液相開機(jī)前先檢查洗針液、柱塞清洗液是否足夠； 2、液相開機(jī)后，首先確保柱塞清洗運(yùn)行，再執(zhí)行其它操作。 3、開機(jī)排氣時，有“purge”閥的儀器應(yīng)先打開“purge”閥再開泵以5ml/min的流速排氣，關(guān)“purge”閥的時候先把流速降到 1ml/min再關(guān)，切不可吧順序弄反，否則系統(tǒng)壓力會瞬間變高。 4、使用自動進(jìn)樣器時，建議啟用“洗針進(jìn)樣”方式，以降低樣品殘留，對于有些強(qiáng)殘留的物質(zhì)可以選擇降低濃度或減小進(jìn)樣量。 5、液相色譜系統(tǒng)壓力高時考慮色譜柱堵了，如果將液相色譜換成兩通壓力依舊高，應(yīng)該考慮系統(tǒng)管路某部分堵了。管路堵的情況下可以使用熱水清洗。對堵塞的通道可以用熱水清洗。
液相色譜不是堵就是漏，原因很簡單！
使用液相色譜儀的小伙伴肯定會遇到漏氣和漏液的狀況，流動相是造成液相色譜各種問題的主要源頭。液相色譜常見的故障一是堵，二是漏。今天就這兩部分別展開討論 。首先，為何會堵?“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌。
制備液相色譜特點和優(yōu)點
高壓—壓力可達(dá)150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。
高速—流速為0.1~10.0 ml/min。
高效—可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達(dá)100種。
高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點：
速度快—通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高—可選擇固定相和流動相以達(dá)到較好分離效果。
靈敏度高—紫外檢測器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達(dá)0.1pg。
柱子可反復(fù)使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收—樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
