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分子實驗介紹——熒光檢測

細胞熒光染色是以熒光物質(zhì)標記而進行抗原定位的技術(shù)。在細胞中，通過特定的標記，可以檢測目的蛋白表達量和表達定位。是細胞中的可直觀觀察細胞內(nèi)蛋白定位和表達的實驗方法。

實驗流程：細胞固定-細胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結(jié)合-熒光二抗結(jié)合-DAPI染色-熒光顯微鏡拍照或激光共聚焦顯微鏡拍照。

結(jié)果示例：

細胞熒光染

通過觀察細胞中蛋白的熒光強度和定位分析該蛋白的表達變化。

分子生物學服務(wù)

 公司建有100平米分子實驗室，配備有PCR儀、定量PCR儀、電泳儀、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫搖床、垂直電泳儀、蛋白轉(zhuǎn)印儀、蛋白發(fā)光成像儀等設(shè)備。除了文中提到了三個主流平臺，外顯子組捕獲方面的新產(chǎn)品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。分子組技術(shù)人員畢業(yè)于中國農(nóng)業(yè)大學、華中科技大學同濟醫(yī)學院、浙江理工大學等高校生物醫(yī)學相關(guān)，全部具有碩士研究生以上學歷，熟練掌握分子生物學相關(guān)實驗，可開展多種分子生物學檢測服務(wù)。

RNA pull down 檢測

RNA   pull down：RNA沉淀檢測，是檢測RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實驗方法之一。全轉(zhuǎn)錄組測序全轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細胞在特定狀態(tài)下所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的總和，包括mRNA和各種noncodingRNA。使用體外轉(zhuǎn)錄將RNA進行生物素標記，并與細胞蛋白裂解液孵育，形成RNA-蛋白復(fù)合物。復(fù)合物通過磁珠結(jié)合后分離，復(fù)合物純化洗脫后通過Western blot驗證檢測特性的蛋白。若篩選可能結(jié)合的蛋白通過質(zhì)譜實驗進行檢測篩選。

二、操作步驟：

1. 所有在純化系統(tǒng)里使用的溶液當日都需要經(jīng)過 0.22μm 的濾膜抽濾、脫氣處理；保存 4℃ 冰箱里的緩沖液若要在室溫使用需恢復(fù)至室溫后抽濾脫氣；

2. 樣品上柱純化前，需先濾膜過濾，少量樣品可用離心（13000rpm，10min）；

3. 依次用水、緩沖液洗泵；設(shè)置流速和柱前警報壓（壓力值參閱層析柱及填料說明書，取較小的一個大耐受壓力）。防止柱中進入氣泡，影響分離效果；

4. 當柱子限壓在 0.3MPa，或者在限壓狀態(tài)下流速很低時，pH valve 中的 Restirtor 可以切換成 Off line，即顯示 By-pass 狀態(tài)；

5. 當需要通過儀器上樣環(huán)上樣時，將 W1 閥口處換成帶透明短軟管的閥門，從此處閥門位通過倒吸樣品上樣；

6. 進樣閥「Inject」為上樣狀態(tài)。上樣結(jié)束可將進樣閥切換回「Load」狀態(tài)。并用純水認真清洗上樣環(huán)至少 3 次；將 W1 閥口處換回原來接頭閥門。

7. 純化結(jié)束后，用純水清洗泵和平衡柱子；再用 20% 的乙醇清洗泵以及系統(tǒng)。長期不用，層析柱應(yīng)保存在 20% 的乙醇中，泵放置在 20% 乙醇中；

8. 實驗結(jié)束后及時傾倒廢液瓶里的廢液；