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什么是熒光顯微鏡？

熒光顯微鏡也是光學顯微鏡的一種，主要的區別是二者的激發波長不同。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡結構和使用方法上的不同。

熒光顯微鏡是熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成。是利用一定波長的光激發標本發射熒光，通過物鏡和目鏡系統放大以觀察標本的熒光圖像。

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熒光顯微鏡的工作原理

光源多采用200W的超高壓燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，工作時由兩個電極間放電，引起蒸發，球內氣壓迅速升高，當完全蒸發時，可達50~70個標準大氣壓力，這一過程一般約需5~15min。超高壓燈的發光是電極間放電使分子不斷解離和還原過程中發射光量的結果。它發射很強的紫外和藍紫光，足以激發各類熒光物質，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

超高壓燈也散發大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環境溫度不宜太高。

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熒光顯微鏡——濾色系統

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激發濾板 根據光源和熒光色素的特點，可選用以下三類激發濾板，提供一定波長范圍的激發光。

紫外光激發濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。

紫外藍光激發濾板:此濾板可使300~450nm范圍內的光通過。常用型號為ZB-2或ZB-3，外加BG-38。

紫藍光激發濾板:它可使350~490nm的光通過。常用型號為QB24(BG12)。

大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達明色素)可用藍綠濾板(如B-7)激發。

開始采用金屬膜干涉濾板，由于針對性強，波長適當，因而激發效果比較玻璃濾更好。

激發濾板分薄厚兩種，一般暗視野選用薄濾板，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。

熒光顯微鏡的使用方法

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(1)打開燈源，超高壓燈要預熱15min才能達到高的亮點。

(2)透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發濾片，在物鏡的后面裝上相應的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。

(3)用低倍鏡觀察，根據不同型號熒光顯微鏡的調節裝置，調整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。

(4)放置標本片，調焦后即可觀察。使用中應注意:未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊鏡油;高壓燈關閉后不能立即重新打開，需待燈完全冷卻后才能再啟動，否則會不穩定，影響燈壽命。

(5)觀察。例如:在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，觀察到經0.01%熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質被激發產生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。