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{微生物檢測}微生物培養(yǎng)

培養(yǎng)

1、根據(jù)培養(yǎng)時(shí)是否需要氧氣，可分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)兩大類。

好氧培養(yǎng)：也稱“好氣培養(yǎng)”。就是說這種微生物在培養(yǎng)時(shí)，需要有氧氣加入，否則就不能生長良好。在實(shí)驗(yàn)室中，斜面培養(yǎng)是通過棉花塞從外界獲得無菌的空氣。三角燒瓶液體培養(yǎng)多數(shù)是通過搖床振蕩，使外界的空氣源源不斷地進(jìn)入瓶中。

厭氧培養(yǎng)：也稱“厭氣培養(yǎng)”。這類微生物在培養(yǎng)時(shí)，不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養(yǎng)過程中，zui重要的一點(diǎn)就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。

2、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)，可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩大類。

固質(zhì)培養(yǎng)：是將jun種接至疏松而富有營養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中，在合適的條件下進(jìn)行微生物培養(yǎng)的方法。

液體培養(yǎng)：在實(shí)驗(yàn)中，通過液體培養(yǎng)可以使微生物迅速繁殖，獲得大量的培養(yǎng)物，在一定條件下，還是微生物選擇增菌的有效方法。

抑菌效力

銅綠假單胞菌菌懸液：接種銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至  

用比濁法制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu。

8.2.2金黃色pt球菌菌懸液：接種金黃色pt球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至             ，用比濁法制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu。

微生物限度檢查

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

   1.供試液制備

   根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過1 小時(shí)。

   常用的供試液制備方法如下。如果下列供試液制備方法經(jīng)確認(rèn)均不適用，應(yīng)建立其他適宜的方法。

   （1）水溶性供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。15-2010食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)GB4789。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

   （2）水不溶性非油脂類供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1：10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。40-2010食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸gan菌檢驗(yàn)GB4789。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

   （3）油脂類供試品 取供試品，加入無菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與zui少量并能使供試品乳化的無菌聚山梨酯80或其他無抑菌性的無菌表面活性劑充分混勻。表面活性劑的溫度一般不超過40℃（特殊情況下，zui多不超過45℃），小心混合，若需要可在水浴中進(jìn)行，然后加入預(yù)熱的稀釋液使成1：10供試液，保溫，混合，并在zui短時(shí)間內(nèi)形成乳狀液。金黃色葡萄qiu菌(Staphylococcusaureus)是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄qiu菌屬(Staphylococcus)，有"嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重gan染。必要時(shí)，用稀釋液或含上述表面活性劑的稀釋液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

   3.抗jun活性的去除或滅活

   供試液接種后，按下列“微生物回收” 規(guī)定的方法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。若試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值小于菌液對照組菌落數(shù)值的50%，可采用下述方法消除供試品的抑菌活性。

   （1）增加稀釋液或培養(yǎng)基體積。

   （2）加入適宜的中和劑或滅活劑。

   中和劑或滅活劑（表2）可用于消除干擾物的抑菌活性，zui好在稀釋液或培養(yǎng)基滅菌前加入。若使用中和劑或滅活劑，試驗(yàn)中應(yīng)設(shè)中和劑或滅活劑對照組，即取相應(yīng)量稀釋液替代供試品同試驗(yàn)組操作，以確認(rèn)其有效性和對微生物無毒性。食源病原微生物可通過接觸物表面、水、土壤、空氣、排泄物、食物等媒介傳播，從而污染“從農(nóng)田到餐桌”的食物鏈任何環(huán)節(jié)。中和劑或滅活劑對照組的菌落數(shù)與菌液對照組的菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2 范圍內(nèi)。

   （3）采用薄膜過濾法。

   （4）上述幾種方法的聯(lián)合使用。

   若沒有適宜消除供試品抑菌活性的方法，對特定試驗(yàn)菌回收的失敗，表明供試品對該試驗(yàn)菌具有較強(qiáng)抗jun活性，同時(shí)也表明供試品不易被該類微生物污染。但是，供試品也可能僅對特定試驗(yàn)菌株具有抑制作用，而對其他菌株沒有抑制作用。——{微生物檢測}常規(guī)鑒定技術(shù)二——(二)生理生化試驗(yàn)微生物生化反應(yīng)：指用化學(xué)反應(yīng)來測定微生物的代謝產(chǎn)物，生化反應(yīng)常用來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物。因此，根據(jù)供試品須符合的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)和菌數(shù)報(bào)告規(guī)則，在不影響檢驗(yàn)結(jié)果判斷的前提下，應(yīng)采用能使微生物生長的更高稀釋級的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。若方法適用性試驗(yàn)符合要求，應(yīng)以該稀釋級供試液作為zui低稀釋級的供試液進(jìn)行供試品檢查。