血液RNA提取常用指南「友名生物」

人ELISA試劑盒的原理及優勢：

　　1、ELISA是以immune學反應為基礎，將抗原、antibody的特異性反應與酶對底物的有效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

　　2、由于抗原、antibody的反應在一種固相載體──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

　　3、Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在immune學檢驗的各領域中。

　　4、ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血1清或血漿中的抗人類HEV病毒Mantibody ELISA檢測。

　　5、ELISA的基礎是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或antibody仍保持其immune學活性，酶標記的抗原或antibody既保留其immune學活性，又保留酶的活性。

小分子類物質包含多肽、天然小分子、化學合成小分子等一系列的物質，被廣泛用于medicine等各個領域。以往小分子的定量檢測主要通過氣相和液相色譜完成，存在周期長，檢測儀器價格昂貴等多方面的不足。那么immune檢測技術可以用于定量檢測小分子嗎？

免1疫檢測試劑盒的技術基礎就是抗原和抗1體的特異性結合，小分子特異性抗1體的制備即是小分子immune檢測試劑盒制備的關鍵之處。小分子由于分子量小，結構簡單，在免1疫學上劃歸為半抗原（Hapten），即只有immune反應性而沒有immune原性的一類物質，不能直接刺激機體產生antibody但是卻擁有和antibody結合的特性。隨著抗1體制備技術的發展，小分子特異性抗1體的制備技術顯得更為多元化

隨著基因組測序、分子生物學檢測手段的快速發展，PCR和熒光定量PCR實驗，正在越來越多的實驗室應用。然而，PCR作為一種高靈敏度的檢測手段，PCR的實驗結果也容易被各種無關的外源性DNA或RNA所干擾。

PCR實驗室中，很容易發生DNA的交叉污染，污染通常來自于離心管、移液器和其他試驗設備產生的DNA氣溶膠，或DNA溶液污染桌面，或吸樣槍不慎將樣品或模板核酸吸入槍內。據估算，一個氣溶膠顆粒可含48000個DNA拷貝。 因此，為保證PCR試驗的數據準確，避免交叉污染，應定期對PCR實驗室做DNA污染情況的監測。

用乙醇沉淀DNA時為什么一定要加NaAc或NaCl

　　在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na 中和DNA分子上的負電荷， 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當加入的鹽溶液濃度太低時， 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當加入的鹽溶液濃度太高時， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過多的鹽雜質存在，影響DNA的酶切等反應，必須要進行洗滌或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來處理?

　　加進去的RNase本身是一種蛋白質，為了純化DNA，又必須去除之，加SDS可使它們成為SDS-蛋白復合物沉淀，再加KAc使這些復合物轉變為溶解度更小的鉀鹽形式的SDS-蛋白質復合物，使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到較好效果。

　　在基因操作實驗中，磷酸鹽緩沖系統(pKa=7.2)和硼酸系統(pKa=9.24)等雖然也都符合細胞內環境的生理范圍(pH)，可作DNA的保存液，但在轉化實驗時，磷酸根離子的種類及數量將與Ca2 產生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反應時，不同的酶對輔助因子的種類及數量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統，由于緩沖液是TrisH /Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時，大都采用Tris-HCl系統，而TE緩沖液中的EDTA更能穩定。