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低溫生物菌種——制備

也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見圖），其中(1)～(4)為孢子制備過程。保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天(或較長時間)。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子，對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基。將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。菌孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28～37℃培養5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產菌種不產孢子，如產生菌或產孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

低溫生物菌種——保存方法介紹

脫水存法

①沙土保存法，能產孢子的細菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內,裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經真空抽干，外觀呈松散狀態,于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。

② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶）相混合，放在安瓿管內于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～10年之久。

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

低溫生物菌種的特點

活性菌量豐富

活性微生物數量是肥效得以充分發揮的基礎。任何一種微生物肥料都必須含有足夠多、有活性的特定微生物，這些特定微生物的數量和純度直接關系到微生物肥料的應用效果，是衡量微生物肥料質量的重要標志。當微生物肥料中特定微生物的數量降低到一定程度，或純度達不到要求時，肥效就會降低甚至失效。由于菌體的存活時間有限，因此微生物肥料的有效期也是衡量微生物肥料的重要因素。

生物菌種的優點

1、根際環境保護屏障：菌群中的地衣芽孢菌等有益微生物施入土壤后，迅速繁殖成為優勢菌群類，控制根際營養和資源，使重茬、根腐、立枯、流膠、灰霉等病原菌喪失生存空間和條件。使植物根系細胞的細胞壁增厚，纖維化、木質化，并生成角質雙硅層，形成阻止病原菌侵襲的堅固屏障。

2、增強抗逆性：菌群中的地衣芽孢菌、巨大芽孢菌、側孢芽孢菌等有益微生物可增強土壤緩沖能力，保水保濕，增強作物抗旱、抗寒、抗澇能力;同時側孢芽孢菌還可強化葉片保護膜，抵抗病原菌侵染，抗病，抗蟲。