血液RNA提取常用指南「友名生物」

人ELISA試劑盒的原理及優(yōu)勢(shì)：

　　1、ELISA是以immune學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、antibody的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的有效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

　　2、由于抗原、antibody的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

　　3、Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在immune學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

　　4、ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血1清或血漿中的抗人類HEV病毒Mantibody ELISA檢測(cè)。

　　5、ELISA的基礎(chǔ)是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或antibody仍保持其immune學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或antibody既保留其immune學(xué)活性，又保留酶的活性。

小分子類物質(zhì)包含多肽、天然小分子、化學(xué)合成小分子等一系列的物質(zhì)，被廣泛用于medicine等各個(gè)領(lǐng)域。以往小分子的定量檢測(cè)主要通過(guò)氣相和液相色譜完成，存在周期長(zhǎng)，檢測(cè)儀器價(jià)格昂貴等多方面的不足。那么immune檢測(cè)技術(shù)可以用于定量檢測(cè)小分子嗎？

免1疫檢測(cè)試劑盒的技術(shù)基礎(chǔ)就是抗原和抗1體的特異性結(jié)合，小分子特異性抗1體的制備即是小分子immune檢測(cè)試劑盒制備的關(guān)鍵之處。小分子由于分子量小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，在免1疫學(xué)上劃歸為半抗原（Hapten），即只有immune反應(yīng)性而沒(méi)有immune原性的一類物質(zhì)，不能直接刺激機(jī)體產(chǎn)生antibody但是卻擁有和antibody結(jié)合的特性。隨著抗1體制備技術(shù)的發(fā)展，小分子特異性抗1體的制備技術(shù)顯得更為多元化

隨著基因組測(cè)序、分子生物學(xué)檢測(cè)手段的快速發(fā)展，PCR和熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，正在越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。然而，PCR作為一種高靈敏度的檢測(cè)手段，PCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也容易被各種無(wú)關(guān)的外源性DNA或RNA所干擾。

PCR實(shí)驗(yàn)室中，很容易發(fā)生DNA的交叉污染，污染通常來(lái)自于離心管、移液器和其他試驗(yàn)設(shè)備產(chǎn)生的DNA氣溶膠，或DNA溶液污染桌面，或吸樣槍不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)。據(jù)估算，一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000個(gè)DNA拷貝。 因此，為保證PCR試驗(yàn)的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，避免交叉污染，應(yīng)定期對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室做DNA污染情況的監(jiān)測(cè)。

用乙醇沉淀DNA時(shí)為什么一定要加NaAc或NaCl

　　在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na 中和DNA分子上的負(fù)電荷， 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時(shí)， 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時(shí)， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過(guò)多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應(yīng)，必須要進(jìn)行洗滌或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來(lái)處理?

　　加進(jìn)去的RNase本身是一種蛋白質(zhì)，為了純化DNA，又必須去除之，加SDS可使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀，再加KAc使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到較好效果。

　　在基因操作實(shí)驗(yàn)中，磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH)，可作DNA的保存液，但在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2 產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反應(yīng)時(shí)，不同的酶對(duì)輔助因子的種類及數(shù)量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng)，由于緩沖液是TrisH /Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時(shí)，大都采用Tris-HCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定。